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色谱技术纯化乳清中的分泌性免疫球蛋白

马特尔施魏格尔,A;恩格尔迈尔,H;希姆莱,G;

分泌性免疫球蛋白(SIg)是粘膜免疫系统的一个主要部分,代表潜在的候选药物。到目前为止,净化它们的平台技术还不存在。以动物乳清中的SIg为模型,开发了一种简单、高效且具有潜在通用性的色谱纯化工艺。测试了几种色谱固定相。两个阴离子交换步骤的结合可以得到最高的纯度。关键步骤是使用小孔阴离子交换器在流动模式下操作。SIg在树脂颗粒中的扩散受到明显阻碍,主要杂质IgG和血清白蛋白被结合。在这一步中,初始纯度从66%提高到89%,一步收率为88%。在使用千兆孔材料的第二个阴离子交换步骤中,通过阶梯式或线性梯度洗脱纯化SIg,得到纯度为> 95%的组分。阶梯梯度洗脱高纯度SIg的阶梯收率为54%。 Elution of SIgA and SIgM with a linear gradient resulted in a step yield of 56% and 35%, respectively. Overall yields for both anion exchange steps were 43% for the combination of flow-through and step elution mode. Combination of flow-through and linear gradient elution mode resulted in a yield of 44% for SIgA and 39% for SIgM. The proposed process allows the purification of biologically active SIg from animal whey in preparative scale. For future applications, the process can easily be adopted for purification of recombinant secretory immunoglobulin species.

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