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炎症小体是多聚异质巨道尔顿蛋白复合物，在宿主对感染和无菌损伤的先天免疫反应中起关键作用。感染或损伤后，炎症小体复合体的组装始于上游形成炎症小体的传感器的寡聚化，并通过一个协调良好的事件和下游效应器功能的多步骤过程进行。总之，这些步骤使优雅的实验读数可靠地评估炎症小体复合体的成功激活和细胞死亡。在这里，我们描述了一个全面的方案，详细描述了几种体外(骨髓来源的巨噬细胞)和体内(小鼠)激活炎症小体的策略，并解释了如何随后并行评估多个下游效应，以明确确定炎症小体和细胞死亡途径的激活状态。我们的工作流程通过含有CARD (ASC)斑点的凋亡相关斑点样蛋白的形成来评估炎症小体激活;caspase-1和gasdermin D的裂解;IL-1的释放?细胞中的IL-18、caspase-1和乳酸脱氢酶;以及通过成像实时分析细胞死亡。分析需要大约24小时才能完成。 Overall, our multifaceted approach provides a comprehensive and consistent protocol for assessing inflammasome activation and cell death.