引用

马蹄蟹体内脂多糖引发的凝血级联反应由三种属于胰蛋白酶原家族的酶原组成:原螯合酶C、原螯合酶B (proB)和原螯合酶(procce)。胰蛋白酶原家族成员包含三个位于活性位点周围的保守二硫化物。虽然已知proB在进化过程中失去了其中一个二硫化物——His-loop二硫化物，但缺失的His-loop二硫化物在proB中的作用仍不清楚。在这里，我们制备了一个proB突变体，命名为proB-murasame，配备了一个再生的His-loop二硫化物。上游?-chelicerase C对proB-murasame的激活率与野生型(WT) proB的激活率无显著差异。得到的蛋白酶螯合酶B-murasame在下游过程中的kcat值是WT螯合酶B的8倍，而螯合酶B-murasame的Km值与WT螯合酶B的Km值相当，被鉴定为级联清除剂的WT serpins-1、-2和-3对WT螯合酶B没有反应性，而螯合酶B-murasame则被WT蛇毒蛋白-2抑制。提示小螯虾B可能在完成级联任务后触发了一些尚未解决的现象。重组脂多糖引发的含probo -murasame的级联产物的CE产量比含WT proB的高5倍。probl -murasame可作为一种高附加值的脂多糖检测试剂。