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炭疽保护抗原(83 kDa, PA83)是炭疽芽孢杆菌产生的致命毒素(LTx)和水肿毒素(ETx)两种主要二元毒素的重要组成部分。在感染期间，LTx和ETx导致免疫崩溃、内皮功能障碍、出血和高死亡率。在细胞受体或循环中的蛋白酶裂解后，20 kDa (PA20) n端被释放，激活与致死因子(LF)和水肿因子(EF)结合的63 kDa (PA63)形式，促进它们进入细胞靶标。以前开发的几种基于elisa的PA方法主要是定性或半定量的。本研究将蛋白质免疫捕获、胰蛋白酶消化和同位素稀释液相色谱-质谱(LC-MS/MS)相结合，建立了一种高选择性、高灵敏度的检测和精确定量总- pa (PA83 + PA63)和PA83的方法。在63 kDa区域的两个胰蛋白酶肽可以测量总pa，在20 kDa区域的三个胰蛋白酶肽可以单独测量PA83。在100升血浆中，检测限为1.3-2.9 ng ml - 1pa。PA83、PA63、LF和EF在血浆中的联合加标回收率实验表明，PA63和PA83的定量与PA83标准相比准确，LF和EF不影响定量的准确性。应用于恒河猴吸入性炭疽热的研究，total-PA表明三相动力学，类似于之前观察到的LF和EF。这项研究首次报道了吸入性炭疽热中PA83的循环，通常低于PA63水平的4%，首次证明激活的PA63是整个感染过程中PA的主要形式。