引用

抗体和蛋白质治疗辅助设计(ADAPT)是一种亲和成熟平台，交织预测和测试，之前在单克隆抗体(mAbs)上进行了验证。这项研究扩大了ADAPT在单域抗体(sabs)的适用性，这是一种有前途的基于重组抗体的生物制剂。作为测试用例，我们使用了骆驼sdAb A26.8，这是一种VHH，可以相对较弱地结合艰难梭菌毒素a (TcdA)，但显示出合理的TcdA中和水平。adapt引导的A26.8亲和成熟仅通过点突变导致一个数量级的改善，达到2nM的平衡解离常数(KD)，与亲本sdAb相比，最佳结合突变体具有相似或更好的稳定性。这种亲和性的改善在细胞水平上产生了6倍的疗效增强;A26.8双突变体T56R,T103R中和TcdA的细胞毒性，ic50为12nM。所设计的具有增加亲和力的突变体预计将与抗原建立新的静电相互作用。除了相邻位置引入的带正电的残基外，突变效应几乎完全可加性。此外，对假阳性预测的分析为改进ADAPT平台指明了大致方向。ADAPT指导了一种抗毒素sdAb的疗效增强，这是一种治疗艰难梭菌的替代治疗方式。