引用

目标
为了提高艰难梭菌感染的诊断准确性，目前的美国和欧盟指南建议在临床相关粪便样本中检测艰难梭菌和毒素以确认活动性疾病的多步检测。一个公认的金标准检测艰难梭菌毒素是细胞毒性中和试验(CCNA)。传统CCNA虽然灵敏度高，但也有局限性。其中一个限制是分析人员对暴露于含有毒素的粪便样本的培养细胞的细胞病变效应的主观解释。为了克服这一限制，开发了一种自动化CCNA，用机器人取代了大多数人类移液步骤，并结合CellTiterGlo®进行半定量、非主观的细胞活力测量，而不是显微镜。

方法
为了确定样本阳性并控制非特异性细胞病变效应，定义了两个阈值，并通过评估使用/不使用抗毒素抗血清的样本(样本-抗毒素/样本+抗毒素)来验证:1)使用含有抗毒素的样本验证>70%细胞活力阈值，2)>1.2倍差异临界值，其中样本结果超过临界值被认为是阳性。

结果
检测结果显示，粪便中毒素b的LOD为126.9 pg/mL，具有良好的准确性、精密度和样品线性性。通过将322份腹泻粪便样本结果与基于显微镜读数的预测CCNA进行比较，临床验证了阳性截断值。与谓词CCNA相比，自动化CCNA显示出96%的敏感性和100%的特异性。结论:总的来说，自动化CCNA提供了一种特定的、敏感的和可重复的工具，以支持确定CDI流行病学或疫苗等干预措施的有效性。