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限制性溶解氧对大肠杆菌艰难梭菌毒素A亚单位表达的影响

沙玛,AK;弗,J;哈提波夫,E;达拉尔,N;安德森,ED;

艰难梭菌毒素A (rARU,也被称为CROPS[组合重复寡肽])c端区域的重复单元被证明可以引发对艰难梭菌的保护性免疫,并且正在考虑作为一种针对这种病原体的可能疫苗。然而,使用标准疫苗生产工艺,重组rARU在大肠杆菌中的表达非常低。转录组和蛋白质组分析表明,在限制溶解氧(DO)条件下,差异表达基因(DEGs)的数量比不限制氧条件下低2.5倍。此外,与不受限制的DO相比,核糖体形成基因(翻译所需)的数量减少了7.4倍。限制性DO下rARU的高表达与24个参与蛋白质折叠的热休克伴侣蛋白的上调以及全局调控RNA伴侣蛋白hfq的上调有关。在不受限制的DO条件下,导致转录、翻译和能量生成途径下调的细胞应激反应与较低的rARU表达相关。对艰难梭菌DNA序列的研究显示,基于BLASTp的结构相似性预测,存在细胞壁结合谱,可能与大肠杆菌的细胞蛋白如转录抑制因子ulaR和锚蛋白重复蛋白相互作用。与不受限制的DO相比,限制性DO下rARU mRNA和蛋白表达分别提高了5倍和27倍。该报告显示了一种通过限制DO生长来改善大肠杆菌中艰难梭菌候选疫苗生产的策略。该策略可以提高厌氧来源或具有细胞壁结合特征的重组蛋白的表达。

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