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将非标准二硫键结合到单域抗体(sabs)中已被证明可以提高热稳定性和其他性能。在这里，我们评估了在IMGT位置40和55的Cys残基之间引入一个新的二硫键对三种类型sdb (VH H, VH和VL结构域)的熔化温度(Tm s)、热展开的可逆性、溶解度和抗原结合亲和力的影响。Cys40-Cys55二硫键被9/9 VH Hs、12/12 VH s和2/11 VL s耐受，质谱证实其形成。利用圆二色性，我们发现Cys40-Cys55二硫键使sdAb Tm平均增加了10.0C(范围:0-21.8C)。然而，增强的热稳定性是以热变性时部分再折叠能力的损失为代价的，并且对于一些sdb，溶解度和抗原结合亲和力显著降低。因此，Cys40/Cys55可以添加到已知位置面板中，用于将稳定的非标准二硫键引入抗体可变结构域，尽管其效果应针对单个sabs进行经验测试。这篇文章受版权保护。版权所有。2019年蛋白质协会。