引用

本文介绍了在小鼠巨噬细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)培养物以及小鼠腹膜炎和内毒素休克模型中诱导和测量不同炎症小体激活的实验方法。基本方案1描述了如何用不同的Toll样受体激动剂和TNF - α激活小鼠巨噬细胞中的炎性小体;如何通过相应的刺激诱导NLRP1、NLRP3、NLRC4和AIM2炎性小体的激活;以及如何测量炎症小体激活介导的白细胞介素(IL) 1β和IL - 18成熟和焦亡。由于已建立的NLRP1激动剂在小鼠和人类之间不一致，《基本方案2》描述了如何激活人类pbmc中的NLRP1炎性小体。Basic Protocol 3描述了如何纯化、交联和检测含有CARD (ASC)焦体的凋亡相关斑点样蛋白。ASC焦体的形成是炎症小体激活的标志。ASC焦体检测的一个局限性是需要相对较大的细胞数量。备选方案1提供了使用抗ASC抗体对ASC焦体进行染色，并在单细胞中通过荧光显微镜测量ASC斑点。腹腔注射脂多糖(LPS)和炎性小体激动剂可诱导腹膜炎，表现为IL‐1β和其他促炎细胞因子升高，中性粒细胞和炎性单核细胞浸润。 Basic Protocol 4 describes how to induce NLRP3 inflammasome activation and peritonitis by priming mice with LPS and subsequently challenging them with monosodium urate (MSU). The method for measuring cytokines in serum and through peritoneal lavage is also described. Finally, Alternate Protocol 2 describes how to induce noncanonical NLRP3 inflammasome activation by high‐dose LPS challenge in a sepsis model. © 2020 Wiley Periodicals LLC.

基本协议1:小鼠巨噬细胞中炎性小体的启动和激活

基本协议2: DPP8/9抑制剂talabostat激活人NLRP1炎性小体

基本协议3: ASC焦体的纯化与检测

备选协议1:免疫荧光染色检测ASC斑点

基本协议4:通过腹腔内注射MSU晶体激活小鼠典型NLRP3炎症小体

备选协议2:腹腔注射LPS可激活小鼠非典型NLRP3炎性小体