引用

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌外膜的组成部分，诱导哺乳动物强烈的促炎反应。这些过程在LPS与CD14(一种gpi连接的质膜筏蛋白)和TLR4/MD2受体复合物连续结合时被触发。我们之前已经发现，当LPS结合CD14时，会触发磷脂酰肌醇4,5-二磷酸[PI(4,5)P2]的生成，这是一种控制后续促炎细胞因子产生的脂质。在这里，我们发现用LPS刺激RAW264巨噬细胞样细胞可诱导脂肪酰化(最可能是棕榈酰化)蛋白水平的全面变化。在这些条件下上调的酰基化蛋白中有磷脂酰肌醇循环的几种酶。通过对RAW264细胞进行17ODYA代谢标记，对酰基化蛋白进行全局分析，17ODYA是一种与炔基功能化的棕榈酸类似物，随后使用生物素-叠氮/链霉亲和素对标记蛋白进行检测和富集，并用质谱进行鉴定。这种蛋白质组学方法显示，在100 ng/ml LPS刺激60分钟的细胞中，154个脂肪酰化蛋白上调，186个下调，306个不受影响。通过Ingenuity Pathway Analysis发现，受LPS影响的酰化蛋白参与不同的生物学功能。对17odya标记和免疫沉淀蛋白的详细研究表明，LPS诱导s -棕榈酰化，从而激活II型磷脂酰肌醇4-激酶(PI4KII)，它将磷脂酰肌醇磷酸化为磷脂酰肌醇4-单磷酸，这是一种PI(4,5)P2前体。PI4KII和PI4KII的沉默抑制了lps诱导的促炎细胞因子的表达和产生，特别是在TLR4的trif依赖信号通路中。相反，过表达PI4KII或PI4KII后，lps诱导的信号通路显著增强; this was dependent on palmitoylation of the kinases. However, the S-palmitoylation of PI4KII, hence its activity, was constitutive in RAW264 cells. Taken together the data indicate that LPS triggers S-palmitoylation and activation of PI4KII, which generates PI(4)P involved in signaling pathways controlling production of pro-inflammatory cytokines.