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耶尔森菌感染巨噬细胞中Pyrin炎性小体组装的检测方法

美第奇,NP;布里斯卡,JB;

耶尔森氏菌效应蛋白YopE和YopT是重要的细菌毒力因子,分泌到受感染的宿主细胞中,可以使Rho gtpase失活,如RhoA, Rac1和Cdc42。为了补偿这种效应的后果,宿主细胞可以感知RhoA修饰并触发促炎反应来控制感染。这种宿主反应,被称为pyrin炎症小体组装,通常由另一种重要效应物YopM阻止,允许耶尔森氏菌抵消这种保守的先天免疫反应。一旦组装,pyrin炎症小体可以通过蛋白水解激活caspase-1,导致IL-1分泌和细胞死亡。在这里,我们描述了如何测量pyrin炎性小体组装,响应YopE或YopT活性,当巨噬细胞感染yopM突变耶尔森氏菌。使用原代小鼠巨噬细胞作为宿主细胞,我们展示了如何通过pyrin去磷酸化、caspase-1蛋白水解、IL-1释放和焦亡等下游事件来检测这种宿主反应。

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