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产热稳定毒素(STa)的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株是发展中国家儿童中至重度腹泻的首要原因，也是旅行者腹泻的常见原因。最近在使用STa类毒素和类毒素融合诱导中和抗STa抗体方面取得的进展加速了ETEC疫苗的开发。然而，值得关注的是，衍生的抗sta抗体是否与sta样鸟苷酸和尿鸟苷酸发生交叉反应，这两种GC-C配体调节人体肠道和肾上皮细胞中的液体和电解质运输。为了在结构和抗原上进一步从鸟苷林和尿鸟苷林中转移STa，并消除抗STa抗体与鸟苷林和尿鸟苷林的交叉反应，我们在双突变体和三突变体STaL9A/N12S、STaL9A/A14H、STaN12S/A14T和STaL9A/N12S/A14H的第9(亮氨酸)、第12(天冬酰胺)和第14(丙氨酸)位点突变STa毒素。然后将每个STa突变体(3个副本)与单一LT突变体(mnLTR192G/L211A)融合，进行类毒素融合3xSTaL9A/N12S-mnLTR192G/L211A。3xSTaL9A/A14H-mnLTR192G/L211A, 3xSTaN12S/A14T-mnLTR192G/L211A和3xSTaL9A/N12S/A14H-mnLTR192G/L211A，检测每个融合物的抗STa免疫原性，并评估衍生抗体对STa毒性的体外中和活性以及与鸟苷林和尿苷林的交叉反应性。这些融合蛋白皮下免疫小鼠产生抗STa抗体，3xSTaN12S- mnltr192g /L211A、3xSTaL9A/N12S-mnLTR192G/L211A或3xSTaN12S/A14T-mnLTR192G/L211A抗体可抑制STa对T-84细胞内cGMP的刺激。竞争性elisa检测结果显示，鸟苷林和尿鸟苷林几乎不阻碍抗sta抗体与包被sta -卵白蛋白偶联物的结合。这些结果表明，3xSTaN12S- mnltr192g /L211A、3xSTaL9A/N12S-mnLTR192G/L211A或3xSTaN12S/A14T-mnLTR192G/L211A产生的抗体可以中和STa毒素，且与鸟苷林和尿苷林的交叉反应性较低，是ETEC疫苗的合适抗原。产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株是儿童腹泻和旅行者腹泻的主要原因。目前，没有获得许可的ETEC腹泻疫苗。一个关键的挑战是确定安全的抗原，以诱导抗体中和关键的STa毒素，而不与鸟嘌呤和尿嘌呤发生交叉反应，这两种重要的配体控制人类肠和肾上皮细胞的稳态。 In this study, we generated nontoxic fusion antigens that induced antibodies neutralizing STa enterotoxicity in vitro and not cross-reacting with guanylin or uroguanylin. These fusions become the preferred antigens for developing ETEC vaccines to potentially prevent the deaths of hundreds of thousands of young children and hundreds of millions of diarrheal cases each year.