引用

由脂多糖(LPS)引发的马蹄蟹凝血级联反应由三种蛋白酶酶原组成，原螯合酶C (proC)、原螯合酶B (proB)和原螯合酶(proCE)。LPS的存在导致proC自催化活化为-螯合酶C，这反过来又激活proB到螯合酶B，将过程转化为凝血酶(CE)。ProB和process包含一个n端剪辑结构域，但这些结构域在这个混凝级联中的作用尚不清楚。在本研究中，利用重组蛋白、动力学和结合实验，我们发现proB clip区域的5个基本残基是维持其lps结合活性和-chelicerase c激活所必需的。此外，在proB clip区域(V55A-proB)的一个潜在疏水腔的氨基酸取代降低了其lps结合活性和激活率。WT过程没有表现出lps结合活性，并且WT螯合酶b介导的在潜在疏水腔中取代的过程变体(v53a过程)的激活大约比WT过程慢4倍。WT螯合酶B与v53a过程相互作用的kcat/Km值比WT螯合酶B-WT过程相互作用的kcat/Km值低7倍。v55a -螯合酶B和V53A-CE对特定肽底物的酶活性与相应的WT蛋白酶没有区别。综上所述，proB的clip结构域将其招募到一个由-chelicerase C和LPS组成的反应中心，在这里-chelicerase C准备激活proB，从而导致chelicerase b通过其clip结构域介导的proCE的激活。由美国生物化学和分子生物学学会授权出版。