引用

延长血清半衰期是大多数蛋白质疗法有效的必要条件。延长半衰期的一种策略是利用血清白蛋白的长循环半衰期，通过加入识别白蛋白的结合部分。在这里，我们描述了骆驼单结构域抗体(VH Hs)，它能在中性和内体pH值下以中高亲和力结合多个物种的血清白蛋白，并显著延长大鼠多种蛋白质的血清半衰期，从几分钟延长到几天。我们偶然发现了另外一个天然pH敏感的VH H (M75):在内体pH值下，与人血清白蛋白(HSA)的结合亲和力显著减弱，与大鼠血清白蛋白(RSA)的结合无法检测到。域映射显示M75与HSA域1和域2结合。此外，HSA His残基的丙氨酸扫描表明，位于HSA结构域2的His247在M75结合及其pH依赖性中起关键作用。等温滴定量热实验提示M75与HSA的质子连接结合，观察到全长HSA和HSA结构域1-结构域2融合蛋白的不同结合焓，其中表面暴露的His残基被Ala取代。M75给予大鼠适度的半衰期延长，从几分钟到几小时，可能是由于在FcRn介导的内体循环过程中，M75与白蛋白构象变化结合，从而阻止了与FcRn的相互作用，与RSA快速分离。人化的VH Hs保持了体内半衰期延长的能力。这些VH Hs代表了一套延长蛋白质治疗半衰期的新工具，其中一种(M75)展示了一种独特的ph敏感结合相互作用，可用于实现适度的体内半衰期。 2020 Her Majesty the Queen in Right of Canada The FASEB Journal 2020 John Wiley & Sons Ltd.