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巨噬细胞是关键的吞噬性先天免疫细胞。当巨噬细胞遇到病原体时，它们会产生抗菌蛋白和化合物来杀死病原体，产生各种细胞因子和趋化因子来招募和刺激其他免疫细胞，并呈现抗原来刺激适应性免疫反应。因此，能够利用rna干扰(RNAi)等技术有效地操纵巨噬细胞，对我们研究这种重要的先天免疫细胞的能力至关重要。然而，巨噬细胞在转染技术上具有挑战性，并且可以表现出低效的rnai诱导的基因敲除。在本方案中，我们描述了使用Amaxa Nucleofector 96孔穿梭系统用siRNA有效转染两种小鼠巨噬细胞系(RAW264.7和J774A.1)的方法，并描述了将siRNA对基因敲除的影响最大化的程序。此外，所描述的方法适用于96口井，可以进行中通量和高通量的研究。为了证明这种方法的实用性，我们描述了利用RNAi抑制调节脂多糖(LPS)诱导的细胞因子产生的基因的实验。